原位雜交簡介

1、定義

原位雜交組織化學技術(in situ hybridization histochemistry;ISHH) 簡稱原位雜交,是一種在組織細胞原位進行的核酸分子雜交技術,敏感度高,特異性強,是當前分子生物學研究的重要手段。 



2、原理

原位雜交技術是在一定的溫度和離子濃度下,使具有特異序列的單鏈探針通過堿基互補規則與組織細胞內待測的核酸復性結合而使得組織細胞中的特異性核酸得到定位,并通過探針上所標記的檢測系統將其在核酸的原有位置上顯示出來。

經特定標記的核苷酸鏈為探針,可與組織切片、細胞或染色體標本中的待檢DNA片段或mRNA進行雜交,然后顯示標記物,從而分析待檢核酸的分布和含量。利用此項技術可研究各種基因在染色體上的定位,編碼某種蛋白質的mRNA在胞質中的表達。


3、意義

在研究DNA分子復制原理的基礎上發展起來的一種技術。其基本原理是兩條核苷酸單鏈片段,在適宜的條件下,能過氫鍵結合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 雙鍵分子的特點,應用帶有標記的(有放射性同位素,如3H、35S、32P、熒光素生物素、地高辛等非放射性物質)DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細胞內待測核酸(RNA或DNA)片段進行雜交,然后可用放射自顯影等方法予以顯示,在光鏡或電鏡下觀察目的 mRNA或DNA 的存在并定位;用原位雜交技術,可在原位研究細胞合成某種多肽或蛋白質的基因表達。此方法有很高的敏感性和特異性,可進一步從分子水平來探討細胞的功能表達及其調節機制。已成為當今細胞生物學、分子生物學研究的重要手段。

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